La creatina quinasa (CK) cataliza la reacción entre la creatina fosfato (CP) y la adenosina 5´-difosfato (ADP) con formación de creatina y adenosina 5´-trifosfato (ATP), convirtiendo esta última la glucosa en glucosa-6-fosfato (G6P) en presencia de hexoquinasa (HK). La G6P es oxidada a Gluconato-6P en presencia de nicotinamido-adenin dinucleótido fosfato (NADP) reducido en una reacción catalizada por la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH).

La conversión se controla cinéticamente a 340 nm a través del aumento de la absorbancia resultante de la reducción del NADP a NADPH, proporcional a la actividad de la CK presente en la muestra.

En este método la inclusión de N-acetilcisteina (NAC) permite la activación óptima del enzima.