En este ensayo directo la α-amilasa cataliza la hidrólisis del sustrato 2-cloro-p-nitrofenil-α-D-maltotriósido (CNP-G3) a pH 6,0 en 2-cloro-p-nitrofenol (CNP) y glucósidos libres.

La reacción se controla cinéticamente a 405 nm a partir de la velocidad de formación de color del CNP producido, proporcional a la actividad α-amilásica en la muestra.